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甘草甙,亦名甘草苷。甘草為豆科甘草屬植物,其根、莖是常用的中草
藥,廣泛分布于我國(guó)的東北,新疆,云南,內(nèi)蒙古,安徽等地,《神農(nóng)本草經(jīng)》把它列為上品稱(chēng)“此草最為眾藥之王,經(jīng)方少有不用者”。甘草的成分復(fù)雜,主要含有三萜類(lèi),黃酮類(lèi),香豆精類(lèi)化合物, 其中黃酮類(lèi)是從甘草提取物中得到的一類(lèi)生物活性較強(qiáng)的成分,其藥化學(xué)成分主要有甘草素,異甘草素,甘草甙,異甘草甙,新甘草甙等。近年來(lái), 國(guó)內(nèi)外都有關(guān)于甘草黃酮類(lèi)化合物的清除自由基、抗氧化、抗促癌、抗致突的作用的報(bào)道

化學(xué)名稱(chēng)

4H-1-Benzopyran-4-one, 2- [4-(β-D-glucopyranosyloxy) phenyl]-2, 3-dihydro-7-hydroxy-, (S)

物理性質(zhì)

一水合物 (稀乙醇或水), 熔點(diǎn) 212～213°℃ 。

藥理作用

毒 性：無(wú)
不良反應(yīng)：暫未知
成分來(lái)源：豆科植物光甘草 Glycyrrhiza glabra L. 根, 甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 根。

甘草原料中的化學(xué)成分十分復(fù)雜,為獲得較好的分離效果以及減少雜質(zhì)對(duì)制備色譜柱的污染,同時(shí)提高目標(biāo)物甘草甙在進(jìn)樣原料中的含量,本實(shí)驗(yàn)采取萃取方法對(duì)原料進(jìn)行前處理。用電子天平稱(chēng)取4g干草放入燒杯中,用量筒準(zhǔn)確量取100mL蒸餾水倒入燒杯中溶解,超聲15min左右,并不斷用玻璃棒攪拌,加速溶解。然后將燒杯放入90℃恒溫槽中加熱2h后熱過(guò)濾,將濾液加入正丁醇溶劑后,靜置數(shù)分鐘后,大部分的甙類(lèi)溶解于正丁醇溶劑中,接著進(jìn)行二次萃取,將殘留在水中的少量的甙類(lèi)萃取出來(lái),最后將二次萃取得到的正丁醇溶液合并濃縮,待層析純化。

甘草甙層析純化

取10mL上述萃取后的產(chǎn)品作為備用的原料,啟動(dòng)泵,流速設(shè)置25mL/min,由流動(dòng)相（甲醇:水=1:4）將原料帶入500mm×40mm的制備柱內(nèi),根據(jù)出峰的情況收集干草甙產(chǎn)品的餾份：前1h的餾份作為前雜質(zhì)餾份收集在一起,然后改變流動(dòng)相比例用50%的甲醇和水的混合液沖洗柱子,每20min接一次產(chǎn)品,然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮各瓶產(chǎn)品后,取20μL進(jìn)行HPLC色譜分析,直到檢測(cè)無(wú)目標(biāo)物為止。選取高效液相色譜檢測(cè)條件為：流動(dòng)相:甲醇:水=3.5:6.5；固定相:硅膠碳18；色譜柱：450mm×4.6mm；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm對(duì)各瓶產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè),得到每20min接一次的產(chǎn)品中,第二瓶甘草甙的含量最高。

甘草甙再次層析純化

由于經(jīng)過(guò)一次層析純化后甘草甙的含量不高,所以選取同樣的方法,取10mL上述純化后的產(chǎn)品作為備用的原料流速為25mL/min,由流動(dòng)相（甲醇:水=2:5）將第二瓶產(chǎn)品帶入500mm×20mm層析柱內(nèi),根據(jù)出峰的情況收集干草甙產(chǎn)品的餾份：每4min接一次產(chǎn)品,然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮各瓶產(chǎn)品后,利用上述相同的檢測(cè)條進(jìn)行HPLC色譜分析,直到檢測(cè)無(wú)目標(biāo)物為止。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn),得到每4min接一次的產(chǎn)品中,第6瓶甘草甙的含量最高,其中保留時(shí)間為5.898min為目標(biāo)峰,經(jīng)面積歸一法計(jì)算含量達(dá)到40%左右。

產(chǎn)品的后處理

將收集的產(chǎn)品在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓蒸餾,溫度為70℃,待溶劑基本全部被蒸出后,用少量的甲醇溶解圓底燒瓶上的固體產(chǎn)品后,并到入試管中在室溫條件下結(jié)晶,直到有白色的粒狀晶體出現(xiàn)。